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2023-09-23 03:42:01
T-vector即T-DNA,是一种可以重组到受体生物染色体上的载体,通常用于植物的基因重组过程中。由于PCR产物的3’端通常含有一个单一的脱氧腺苷(A ),与T载体的A-T互补性可以提高PCR产物克隆的效率。
染色体是真核细胞在有丝分裂或减数分裂过程中特定形式的遗传物质。是间期细胞染色质结构紧密包装的结果,是染色质的高级结构,只在细胞分裂时出现。染色体具有物种特异性,其数量、大小和形态随不同的生物物种、细胞类型和发育阶段而不同。
通过将甘露聚糖酶基因克隆到PMD-18t载体中构建质粒pMD-18Tman2XcmI,在克隆的甘露聚糖酶基因的两侧引入特异性XcmI限制性位点。t载体可以通过用XcmI消化质粒pMD-18Tman2XcmI来制备。由于甘露聚糖酶基因受半乳糖苷酶基因启动子控制,作为填充片段和筛选标记,甘露聚糖酶可以表达,从而水解甘露聚糖产生水解圈,指示部分消化质粒的背景菌落。此外,甘露聚糖酶基因中还有第三个不同序列的XcmI消化位点。因此,可以进一步降低残留甘露聚糖酶基因引起的背景。提取并保存大量质粒,T载体可以随时准备使用,增加了克隆的稳定性。该T载体克服了一般T载体质量不稳定、价格昂贵、克隆效率低、假阳性率高等缺点。利用构建的T载体克隆了10个基因,结果表明重组效率达到90% ~ 100%。
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2023-08-27 17:48:02