凯氏定氮法测定蛋白质含量

科普大全 2023-08-09 06:00:02

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凯氏定氮法测定蛋白质含量

凯氏定氮法是由荷兰科学家凯氏定氮法于1833年创立的，目前已发展为可变定义、小量、平量的凯氏定氮法及其自动定氮仪法等。这是分析有机化合物中氮含量的常用方法。凯氏定氮法的理论基础是蛋白质中的中间氮含量一般占其总质量的16% (12%~ 19%)左右。因此，可以根据被测物质中的中氮含量(假设被测物质中的氮全部来自蛋白质)来估算物质中的总蛋白质含量，即蛋白质含量=中氮含量/16%。

凯氏定氮法是一种测量化合物或化合物中高锰酸盐指数的方法。即在金属催化剂标准下，用硫酸消化吸收样品，将有机化学氮转化为无机铵盐，然后在偏碱标准下将铵盐转化为氨，用水蒸气蒸馏出来，用过量的硼酸溶液消化吸收，然后用标准盐酸滴定管即可计算出样品中的氮含量。由于蛋白质中的氮含量相对稳定，可以由氮含量计算出蛋白质的含量，因此该方法是一种经典的蛋白质定量分析方法。

凯氏定氮法的基本原理

蛋白质是一种含氮量中等的有机化合物。蛋白质、硫酸和金属催化剂共同加热消化吸收分解蛋白质，溶解的氨与盐酸熔融转化为硫酸铵。然后用脱灰水蒸汽蒸馏分散氨，用硼酸溶液消化吸收，再用盐酸或盐酸标准溶液滴定，根据用酸量乘以计算指标，计算成蛋白质含量。中等含氮量*6.25=蛋白质组成。

1.有机化合物中的氨在高热、硫酸铜和浓硫酸的作用下，通过硝化转化为(NH4)2SO4。

凯氏定氮法

反应方程式是:

2.在凯氏定氮仪中与碱反应，水蒸气蒸馏释放的NH3收集在H3BO3水溶液中。

反应方程式是:

3.用已知H2SO4(或HCI)浓度的标准溶液滴定管，根据HCI的消耗量计算出氮气的组成，然后乘以相关计算因子，得到蛋白质的组成。

反应方程式是:

或者

凯氏定氮实验试剂

所有实验试剂都是用不含氨的纯水配制的。