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2023-10-12 06:43:01
蛋白纯化原理及步骤
科普大全 2023-10-09 02:04:01
许多生活朋友不知道蛋白纯化原理及步骤，对此很疑惑，那么今天就和小编一起来看看吧，一定可以帮助到你。
分离和纯化蛋白质的常用方法有:
1.电泳:
原理:蛋白质在高于或低于其等电点的溶液中带电，在电场中可以向电场的正极或负极移动。
步骤:根据支持物不同，有薄膜电泳、凝胶电泳等。
2.色谱法:
原理A:离子交换层析，利用蛋白质的两性游离特性。在一定的PH值下，每种蛋白质的电荷量和性质不同，因此可以用离子交换色谱分离。例如，在阴离子交换色谱中，具有小负电荷的蛋白质首先被洗脱。
步骤:分子筛，也称凝胶过滤。蛋白质这种小分子进入洞内并长时间停留，而蛋白质这种大分子不能及时进入洞内，直接流出。
蛋白纯化原理及步骤
蛋白质纯化要利用不同蛋白质之间固有的异同，利用各种蛋白质之间的相似性去除非蛋白质物质的污染，利用蛋白质之间的差异从其他蛋白质中纯化出目的蛋白质。每种蛋白质在大小、形状、电荷、疏水性、溶解性和生物活性方面存在差异，这些差异可用于从混合物如大肠杆菌裂解物中提取蛋白质，以获得重组蛋白。
蛋白质的纯化大致可以分为两个阶段:粗分离阶段和精纯化阶段。蛋白质纯化的一般方法是树脂法。在粗分离阶段，目标蛋白质主要与其他细胞成分如DNA和RNA分离。此时由于样品体积大，成分杂，要求使用的树脂容量大，流速高，颗粒大，粒径分布宽，蛋白质能与污染物快速分离。必要时可加入相应的保护剂(如蛋白酶抑制剂)，防止目的蛋白被降解。
蛋白纯化原理及步骤
1.机械破碎法该方法利用机械力的剪切作用来破碎细胞。常用的设备有高速组织捣碎机、均质机、研钵等。
2.渗透破碎法这种方法是在低渗透条件下使细胞膨胀破碎。3.反复冻融法生物组织冷冻后，胞内液冻结膨胀，导致细胞破裂。这种方法简单方便，但需要注意的是不适合对温度变化敏感的蛋白质。
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